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熒光定量PCR,你了解多少

點擊次數(shù):1872  更新時間:2020-11-25
       實時熒光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一種在DNA擴增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法,通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。
技術(shù)原理:
       實時熒光定量PCR,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進入平臺期。將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋進行Real Time PCR,按照起始DNA量由多到少的順序等間隔得到一系列擴增曲線。Ct值與起始模板數(shù)的對數(shù)值之間存在線性關(guān)系,可以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知濃度的樣品也得到Ct值,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,就可以求出未知樣品的起始模板量。
       PHS智能熒光定量PCR儀主要用于基因擴增檢測,通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或探針等試劑,熒光型號不斷累積實現(xiàn)實時監(jiān)測PCR擴增反應(yīng)全過程,通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線,終達到檢測目標(biāo)基因的目的。用于基因定性定量分析,基因檢測,基因分型,SNP分析(單核苷酸的多態(tài)性),RFLP多態(tài)性分析(限制性片段長度多態(tài)性),基因表達研究,高通量基因表達譜研究,以及STR鑒定等檢測。