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熒光定量PCR儀每個循環(huán)包括這三個關(guān)鍵步驟

點擊次數(shù):1966  更新時間:2022-03-02
  熒光定量PCR儀是功能強大的定量PCR平臺,可提供可靠的性能、靈活性和可擴展性,可滿足臨床診斷實驗室不斷變化的需求。它兼容多種快速更換模塊,如96孔、96孔快速、384孔以及不同通量的微陣列芯片反應(yīng)模塊,讓用戶可以隨意選擇實驗通量方案。
  熒光檢測采用PMT傳感器,靈敏度高,光譜帶寬大,功能強大,具有定性、定量、基因變異、基因表達、熔解曲線等分析功能。儀器控溫性能,升溫速率≥5.0℃/s,可實現(xiàn)單份檢測,檢測動態(tài)范圍100~1010份。熒光定量PCR儀無邊緣效應(yīng),無光路校正,頂部激發(fā)/檢測,非接觸式測量,試劑適應(yīng)性強,的自診斷和自檢測功能,使用維護方便,長壽命LED光源,穩(wěn)定的發(fā)射波長和免維護。
  熒光定量PCR儀每個循環(huán)包括這三個關(guān)鍵步驟。通常,它運行40個周期。
  1、幼化:雙鏈DNA通過高溫孵育“溶解”成多肽鏈,單鏈DNA的二級結(jié)構(gòu)松動。一般DNA聚合酶可以承受較大的溫度(一般為95℃)。如果免費模板的GC含量高,時間會有所提高。
  2、熱處理:在整個熱處理過程中,與開放閱讀框的緊密接觸有機會引起雜交雜交。因此,解鏈溫度(TM)應(yīng)根據(jù)計算個人所得稅的引物設(shè)計,并選用合適的溫度(一般比引物設(shè)計的TM低5℃)。
  3、擴寬:70-72℃中間,DNA聚合酶活性為,引物加寬速度可達每秒100個堿基。隨即,熒光定量PCR中擴增的精彩畫面就小了。通常,該步驟與溫度為60°C的熱處理步驟相結(jié)合。使用隨機引物設(shè)計或寡核苷酸(DT)和隨機引物設(shè)計化學(xué)品。用于cDNA轉(zhuǎn)化的溫度取決于所選的RT酶。逆轉(zhuǎn)錄后,將約10%的cDNA轉(zhuǎn)移到單獨的試管中進行及時的熒光定量PCR。